一、Masson染色基本原理

Masson染色時膠原纖維呈藍色(被苯胺藍所染)，肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染),這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關。不同的組織和細胞成分,它們的孔隙大小是不同的?？紫兜拇笮?決定了組織的滲透性。如孔隙小,組織結構致密,滲透性低；孔隙寬,組織結構疏松,滲透性高。如已固定的組織用一系列陰離子水溶性染料先后或混合染色,則可發現紅細胞被最小分子的陰離子染料著染.肌纖維與胞質被中等大小的陰離子染料著染,而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說明了紅細胞對陰離子染料的滲透性最小,肌纖維與胞質次之,而膠原纖維具有最大的滲透性。根據組織不同的滲透性能,選擇分子大小不同的陰離子染料進行染色,便可把不同組織成分顯示出來.而染料分子的大小,主要由其分子量來體現。小分子量者易于穿透結構致密、滲透性低的組織,而大分子最者則只能進入結構疏松,滲透性高的組織。一般來說,結構疏松,滲透性高的組織多選擇大分子染料,而結構致密,滲透性低的組織多選擇小分子染料。

三、實驗主要試劑

Regaud 氏蘇木精：蘇木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸餾水80ml。

將蘇木精加入蒸餾水內加溫溶解,冷卻后加入酒精和甘油,放數日后即可應用。

Masson麗春紅酸性復紅液： 麗春紅0.7g，酸性復紅0.3g，蒸餾水99ml，冰醋酸1ml。

0.2%冰醋酸水溶液： 冰醋酸0.2 ml，蒸餾水100 ml。

1%磷鉬酸水溶液：磷鉬酸1g，蒸餾水100 ml。

苯胺藍水溶液：苯胺藍2g，蒸餾水98 ml，冰醋酸2 ml。

1%光綠水溶液：光綠 1g，蒸餾水100 ml。

三、實驗步驟

1． 石蠟切片脫蠟至水。

2． 鉻化處理或去汞鹽沉淀（甲醛固定的組織此步可略）。

3． 依次自來水和蒸餾水洗。

4． 用Regaud蘇木精染液或Weigert蘇木精液染核5-10min。

5． 充分水洗,如過染可鹽酸酒精分化。

6． 蒸餾水洗。

7． 用Masson 麗春紅酸性復紅液5-10min。

8． 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

9． 1%磷鉬酸水溶液分化3-5min。

10. 不經水洗,直接用苯胺藍或光綠液染5min。

11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

12．95%酒精、無水酒精、二甲苯透明、中性樹膠封固。

四、注意事項：

1．控制好染色步驟。

2．組織固定起著很重要的作用，根據不同的固定液可延長或縮短染色時間。

3．0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色調清晰鮮艷。

4．磷鉬酸水溶液對麗春紅、酸性復紅有分化作用，分化時鏡下控制， 肌纖維和纖維素呈紅色，膠原纖維呈淡粉紅色即可。

五、結果提供 膠原纖維、粘液、軟骨呈藍色（如光綠液染色為綠色），胞漿、肌肉、纖維素、神經膠質呈紅色，胞核黑藍色。

1、完整的實驗報告（包含試劑、耗材、操作步驟、病理結果）；

2、原始病理照片，一般提供100倍、400倍照片各2張；

3、如果客戶提供的是組織，我們提供包埋、染色片

六、樣本要求

取材保持組織新鮮（組織塊以小于2cm*1.5cm*0.3cm為宜），立即放入固定液（固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液，體積為組織塊的10倍以上）中，避免干燥；對于有血跡的樣本，可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中

七、服務流程

威斯騰生物服務項目

分子生物學檢測	蛋白質與免疫學	動物實驗
實時熒光定量PCR	單克隆抗體制備	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗體制備	抑郁癥動物模型
ELISA（酶聯免疫吸附法）技術	Western-blot 實驗服務	脊髓損傷模型
生化指標檢測	蛋白雙向電泳實驗服務	腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測	原核蛋白表達純化	骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表達純化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白質組學	心力衰竭模型
	SLAC蛋白組學	肺動脈高血壓動物模型
		高血壓模型
病毒包裝純化	實驗課題整體外包	粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化	整體課題外包	大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化	細胞整體實驗外包	慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化	動物整體實驗外包	過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代細胞培養	肝纖維化模型
細胞因子芯片	骨髓間充質干細胞培養	膽結石模型
生長因子芯片	脂肪干細胞培養	急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片	心肌成纖維細胞培養	急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片	軟骨細胞培養	體內血栓模型
生長因子芯片	血管內皮細胞培養	關節炎模型
炎癥因子芯片	神經元細胞培養	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	內皮組細胞原代培養	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因編輯動物
趨化因子芯片	電生理相關服務	動物整體實驗服務
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片	膜片鉗實驗
細胞生物學	高通量測序	代謝組學
細胞原代培養	mRNA測序	氣相色譜GC/MS
MTT檢測	LncRNA測序	液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測	全基因組測序	核磁共震NMR
細胞周期檢測	RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗	外顯子測序	影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲	16s擴增子測序	Micro-CT
流式分選	Small RNA測序	小動物活體成像
CCK8/XTT檢測	宏基因組測序	核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性	單細胞測序	PET-CT
藥物篩選細胞學實驗	circleRNA測序
細胞粘附性檢測	甲基化測序	基因編輯動物
細胞劃痕實驗		條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗		全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理學檢測	CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入	基因芯片
掃描電鏡	基因定點突變細胞系	LncRNA芯片
透射電鏡	單基因敲除細胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除細胞系	mRNA芯片
免疫組化	目的基因敲入細胞系	甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本）
Tunel（原位末端凋亡法）檢測	報告基因敲入細胞系	SNP芯片（限人和小鼠來源樣本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色	CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交	基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交	基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等）
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	常規藥物體外篩選	抗炎免疫藥物藥效學評價

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