一、實驗動物

選擇SPF 級SD大鼠，6~8w齡，體重250-280 g，雄性。

二、實驗步驟

1、動物適應性喂養

動物保持12h-12h晝夜交替，自由飲水、進食，溫度23-25℃，適應性喂養一周后進入實驗。

2、SD大鼠MCAO模型構建

參照Longa線栓法阻塞大鼠右側大腦中動脈（MCA），建立急性局部腦缺血再灌注模型。具體步驟為：大鼠稱重，7%水合氯醛（0.5ml/100g）腹腔注射麻醉，頸前部備皮、消毒，然后將大鼠仰臥位放置于操作臺上，鈍性分離右側皮下組織及肌肉暴露出頸總動脈，眼科鑷小心分離伴行于頸總動脈的迷走神經及動脈周圍粘膜組織。繼續向頭部分離，小心剔除覆蓋于動脈上方的粘膜組織，可見頸外動脈、頸內動脈與頸總動脈呈“Y”字形分布，游離出獨立的頸內、外動脈。頸外動脈遠心端結扎（用燒燙的鑷子熔斷遠心端便于插入栓線），近心端埋線以備結扎拴線，再用微動脈夾夾閉頸總動脈近心端和頸內動脈遠心端，用顯微外科剪將頸外動脈剪一小口，將栓線由頸外動脈切口處插入頸內動脈，用預先埋線結扎頸外動脈防止出血，松開微動脈夾，將栓線送入顱內，有明顯的阻力感，表明栓線已插入MCA，局部腦缺血模型即告成功。醫用棉簽清理頸部血塊，縫合皮膚，酒精棉球消毒，將大鼠放回籠子。

插線成功即為腦缺血開始，將栓線輕柔退致頸外動脈處，即為再灌注開始。術后動態觀察大鼠的反應。麻醉后保溫致動物蘇醒，肛溫36.5±0.5℃。

3、腦室給藥

實驗鼠頭部備皮后固定于腦立體定位儀，頭頂皮膚消毒，沿中線切開頭皮，剝離筋膜，標記前囟，穿刺點位于矢狀縫右旁1mm，冠狀縫后1.5mm，進針深度1.5mm。高速顱骨鉆于右側腦室注射部位正上方鉆穿顱骨，插入微量注射器，緩慢注入藥液，注射完畢后留針數分鐘，緩慢移出注射器，涂抹骨蠟，縫合外皮，完成腦定位注射。

4、建模后神經功能缺損評分以及TTC染色檢測腦梗死灶分布

參照Zea Longa 5級神經功能缺損評分法對大鼠進行神經功能評分。0分：無神經功能缺損；1分：輕度局灶神經功能缺陷（不能完全伸展缺血對側前肢）；2分：中度局灶神經功能缺陷（向缺血對側轉圈）；3分：重度局灶神經功能缺陷（向缺血對側傾倒）；4分：不能自發行走，昏睡。

第一次評分：篩選神經功能評分在1-3分的大鼠納入實驗對象，剔除神經功能評分為0分和4分的大鼠。

第二次評分：于取材前進行評分記錄各組間大鼠神經功能評分的差異。

5、WB 法檢測相關蛋白指標表達

根據如下實驗結果可見，與正常對照相比，A蛋白在模型組中表達增加，經過藥物干預后表達降低。