威斯騰生物經過10多年的發展，獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗，并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件，萬級凈化細胞房，這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時，威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗，結合平臺已有的技術優勢，建立了完善的體外藥篩實驗，并引進RTCA(Real-time cellular Analysis，實時無標記細胞記錄儀），在藥篩過程中，全程實時記錄細胞真實狀況，為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

無菌操作注意事項

細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風30min，操作前需要換細胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上一次性口罩和帽子，操作時不能大聲說話，整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。

甲狀腺相關性眼病患的眼眶成纖維細胞原代培養

（1）無菌條件下，取出結締組織（人眼眶結締組織，重慶醫科大學附屬第二醫院提供）后在含2×雙抗的預冷的PBS中洗3次。

（2）在PBS中除去脂肪組織，將結締組織剪成約2mm2小塊。

（3）用完全培養基將細胞培養板潤洗一遍，待組織稍干后小心貼于細胞培養板上。

（4）將貼有組織的細胞培養板置于細胞培養箱中倒置30min，使組織盡快貼壁。

（5）30min后將完全培養基加入細胞培養板中，剛好沒過組織即可，培養數天。

（6）3d后半量換液，隔日觀察細胞爬出情況并添加培養基。

約8d后有細胞爬出。

大鼠心肌成纖維細胞原代分離培養

（1）將SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min，然后固定在泡沫板上，先用碘酒消毒胸腹部，再用酒精消毒。取出無菌剪刀和鑷子，先用酒精棉球再次消毒，剪開胸，取心尖部位，快速置于含雙抗的預冷的PBS溶液潤洗3遍。

（2）剔除周圍結締組織，將心臟置于無菌平皿中，將心臟盡量剪碎，平皿內加入適量0.125%的胰酶，在37度培養箱中，采用分次消化，每次消化5分鐘，一共消化8~10次。

（3）每次消化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM/F12培養基，輕輕混勻，中和胰酶的消化，防止消化多度。用100目細胞過濾篩子過濾含細胞的混合液，最后將過濾后的細胞懸液1000R/MIN離心5分鐘。離心后收集沉淀，用PBS再次重復離心3次。用細胞培養基將細胞沉淀重懸。于細胞培養瓶中培養。

（4）在培養90分鐘左右，將未貼壁的細胞懸液吸出。此時已經貼壁的是心肌成纖維細胞，加入DMEM/F12培養基，放入培養瓶繼續培養。

（5）24h換液，并每日觀察心肌成纖維細胞的生長。

威斯騰實驗服務流程

威斯騰生物服務項目

【本平臺合作項目】
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